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使用美國伯樂PCR儀進行試驗要注意哪些事情
點擊次數:1494 更新時間:2021-11-05
 
  簡單的說,美國伯樂PCR儀就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。
 
  目前,常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定量PCR儀四類。
 
  美國伯樂PCR儀的實驗操作注意事項:
 
  盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意:
 
  1.戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立即更換手套;
 
  2.使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
 
  3.避免反應液飛濺,打開反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
 
  4.操作多份樣品時,制備反應混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應的精確度;
 
  5.最后加入反應模板,加入后蓋緊反應管;
 
  6.操作時設立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應的可靠性,又可以協助判斷擴增系統的可信性;
 
  7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器最容易受產物氣溶膠或標本DNA的污染,最好使用可替換或高壓處理的加樣器。
 
  如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應該專用,不能交叉使用,尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區;
 
  8.重復實驗,驗證結果,慎下結論。
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