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熒光定量PCR儀常見的故障解決方法有哪些
點擊次數:377 更新時間:2023-02-22
  熒光定量PCR儀是一種利用熒光技術實現核酸分子擴增的儀器,其工作原理可概括為:
  1)檢測DNA樣本:根據實驗要求,將DNA樣本加入實驗支架,并置于定溫的PCR儀中進行處理。
  2)擴增DNA:進行PCR循環,即把該DNA樣本通過反轉錄酶(RT)從核酸狀態變成具有特定基因序列的DNA鏈。
  3)檢測基因序列:利用特定的含有熒光探針的PCR擴增產物,熒光探針是一種特定結合到特定基因序列上的分子標記,在接觸能夠激發熒光的激發劑時,能夠發出熒光信號。
  4)計算DNA濃度:通過檢測得到的熒光值可以計算出該DNA樣本的濃度。
  熒光定量PCR儀常見的故障解決方法有哪些:
  1、探頭檢測不準確。當定量PCR儀檢測到探頭信號不準確時,可以嘗試使用不同的探頭,或者更換探頭(適當減少擴增溫度也是一種可能性),以確保精確分析結果。
  2、儀器讀取不準確。當定量PCR儀讀取數據出現異常時,可以檢查儀器設置,例如查看相關的靈敏度調節參數并調整儀器設置,確保讀取正確的值。
  3、無法正確識別反應曲線。在定量PCR實驗結束后,反應曲線可能會變得不太明顯,此時可以嘗試使用不同的PCR反應體系,比如改變反應溫度或使用更高的模板濃度,也可以更換酶以獲得較好的反應曲線。
  4、圖形異常。若定量PCR圖形出現異常,則可能是工作液不夠穩定或有其它問題,需要重新校準儀器。
  5、反應期產物剩余多。如果發現反應期產物剩余過多,則需要檢查儀器設置,確保溫度設置正確。
  6、實驗反應效率低。在實驗中可能會發現反應效率較低,這種情況下可能是由于反應溫度過高或過低,使產物的活性降低,此時可以嘗試使用適當的溫度、模板濃度或酶類型來提高反應效率,以便獲得較好的結果。
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